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El henequén (Agave fourcroydes Lem.) es una especie vegetal de gran valor agrícola y ecológico conocida mundialmente por la calidad de su fibra usada con fines industriales. Esta especie se propaga a gran escala por métodos asexuales, pero las tecnologías de propagación actuales no son capaces de satisfacer la demanda de los productores. A. fourcroydes ha sido propagado in vitro pero muestra comportamiento recalcitrante durante las fases de multiplicación y enraizamiento. En este estudio se demostró que la combinación de 6-benzilaminopurina (BAP) (0.75 mg L^-1) y ácido indolbutírico (IBA) (1.0 mg L^-1), en lugar de ácido 2,4-diclorofenoxiacético (2,4-D), mejoró significativamente la supervivencia de los explantes y la brotación durante la fase de establecimiento in vitro a partir de brotes jóvenes. La combinación de thidiazuron (TDZ) (0.5 ó 0.75 mg L^-1) con BAP (1.0 mg L^-1) e IBA (1.0 mg L^-1) en el medio basal incrementó la tasa de multiplicación del henequén y aceleró la ruptura de la dormancia de las yemas. La mayor eficiencia de enraizamiento se obtuvo cuando el medio basal fue suplementado con 0.5 o 0.75 mg L^-1 de ácido naftalenacético (NAA), obteniéndose un 100% de plantas enraizadas y un promedio de 9.40 y 11.55 raíces por planta. El 94% de las plantas sobrevivió el proceso de aclimatización ex vitro y no se observaron desórdenes fisiológicos en ninguna de las plantas. La modificación de la composición de reguladores del crecimiento vegetal en el medio de cultivo fue un factor clave para mejorar la eficiencia de la tecnología de micropropagación de henequén.