RESUMEN.
DETECCiÓN ESPECíFICA MEDIANTE PCR DE UN AISLADO DEL VIRUS PLUM POX (PPV) EN CHILE

Marlene Rosales V.1, Patricio Hinrichsen R.1 y Guido Herrera M.1
 

El virus plum pox (PPV, potyvirus) es el agente causal de la enfermedad de Sharkas. Este virus ataca severamente árboles frutales de carozo, donde usualmente se encuentra en muy bajos títulos e irregularmente distribuido en diferentes tejidos de la planta. Hasta ahora, PPV estaba restringido a Europa y la parte norte de África, pero el virus fue detectado por primera vez fuera de esa región, en Chile (Acuña, 1993), en el Campo Experimental Los Tilos del INIA (Santiago). Considerando la importancia crucial de esta enfermedad, se hace necesario contar con una técnica de detección de alta sensibilidad para controlar su dispersión. En este trabajo se presenta la optimización de un método de detección basado en la reacción de la polimerasa en cadena (PCR), lográndose la amplificación especifica de un fragmento del genoma viral. A partir del RNA viral presente en un extracto crudo de hojas o frutos, se preparó cONA correspondiente al extremo 3' del virus. Este cONA sirvió de templado en una reacción de PCR, usando partidores que reconocen y se alinean en secuencias específicas del extremo 3' del genoma viral. Con este procedimiento se amplificó un fragmento de 243 bp, correspondiente a la región carboxi-terminal del gen de la proteína de cubierta viral (partidores de CP) y un fragmento de 220 bp de la región 3'-no codificante del genoma de PPV (partidores de 3'-NCR). La amplificación de estos fragmentos de AON permitió la detección específica del virus en 24 muestras, de un total de 28, en su mayoria sero-positivas frente a un anticuerpo policlonal anti-PPV, aunque sólo un 36% de estas muestras presentaban sintomas visuales de la enfermedad.

Palabras Claves: RT-PCR, enfermedad de Sharkas, virus, diagnóstico, PPV, Prunus sp.
1 Centro Regional de Investigación La Platina (INIA), Casilla 439, Correo 3, Santiago, Chile.